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- 廣州健侖生物科技有限公司
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[聯(lián)系地址]：廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園1棟4067室
[聯(lián) 系 人]：林
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豬偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒
發(fā)布時間：2013/9/30 11:44:00 瀏覽次數(shù)：712- 基本信息
- 產(chǎn)品類型： 其它
質(zhì)量標準：
零售價格： 0
供貨價格：
詳情介紹
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偽狂犬病毒PCR檢測試劑盒使用說明
【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
【營銷中心】 廣州市中山大道中358號東溪大廈B座511室
【公司地址】 廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園一幢4067室
【試劑盒簡介】
豬偽狂犬病毒PCR 檢測試劑盒，采用聚合酶鏈反應（PCR ）技術檢測豬血清和組織中的PRV，適用于PRV的檢測、診斷和流行病學調(diào)查。
【原理】
提取DNA作為模板，在DNA 聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán)，使特異DNA 片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴增的DNA 片段進行電泳、染色后，在紫外燈下，肉眼可見DNA 片段的擴增帶。
【試劑盒組份】
1. 裂解液
8mL
8. 陽性對照
2. 蛋白酶K
110μL
9. 0.2 mL 薄壁PCR 管
15個
3. 抽提液
8mL
10. PCR 反應液A
180μL
4. 異丙醇
7mL
11. PCR 反應液B
50μL
5. 洗滌液
12mL
12. 50 倍TAE 電泳緩沖液
20mL
6. 無菌水
500μL
13. 染色液
7. 陰性對照
300μL
10μL
注：塑料袋內(nèi)試劑（陽性對照、蛋白酶K、PCR反應液A和B）-20 ℃凍存，其他室溫保存。
【操作方法】
一、樣品制備
1樣品采集：病死或撲殺的豬，取大腦海馬背側(cè)皮層、中腦、腦橋、扁桃體、淋巴結(jié)等組織；待檢活豬，用棉拭子取鼻腔分泌物，置于50%甘油生理鹽水中，或用注射器取血5 mL，2～8 ℃保存。（要求送檢病料新鮮，嚴禁反復凍融。）
2樣品處理：
2.1 組織樣品的處理：稱取組織0.1g于研磨器中磨碎，再加1mL生理鹽水繼續(xù)磨至無塊狀物；然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5 mL滅菌離心管中，8000 rpm離心5 min，取上清100 μL于1.5 mL 滅菌離心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混勻后37℃溫育1h。
2.2 全血樣品的處理：待血凝后取血清放于離心管中，8000 rpm離心5 min，取上清100 μL于1.5 mL 滅菌離心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混勻后37℃溫育1h。
2.3 陽性對照的處理： 混勻后取100 μL于1.5 mL 滅菌離心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混勻后37℃溫育1h。
2.4 陰性對照的處理： 混勻后取100 μL于1.5 mL 滅菌離心管中，加入500 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，混勻后37℃溫育1h。
二、病毒DNA的提取
1. 取出已處理的樣品、陰性對照和陽性對照，分別加入600μL抽提液（用抽提液之前不要晃動，不要吸到上層保護液），用力顛倒10次混勻，12,000 rpm 離心10min。
2. 取500μL上清置于滅菌離心管中，加入500μL異丙醇，混勻，置液氮中3min或-70℃冰箱中30min。取出樣品管，室溫融化，13,000 rpm 離心15min。
3. 棄上清，沿管壁緩緩加入1mL 洗滌液，輕輕旋轉(zhuǎn)一周后倒掉，將離心管倒扣于吸水紙上1min，再將離心管真空抽干15min或37℃烘干。
4. 用30μL無菌水溶解沉淀，作為模板備用。
三、PCR
1. 反應體系：分別取16μL PCR反應液A（用前混勻）、2μL PCR反應液B（用前混勻）和2μL模板DNA，混勻。
2. 反應程序：在PCR儀上運行以下程序： 94 ℃ 3 min ；94 ℃ 30 s 、55℃ 30 s 、72 ℃ 30 s，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。
四、電泳
1. 制膠：用50倍稀釋的TAE電泳緩沖液配制1%瓊脂糖凝膠。
2. 電泳：待膠凝固后，取5μL PCR擴增產(chǎn)物點樣于瓊脂糖凝膠孔中，以5V/cm的電壓于50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液中電泳。
3. 染色：取50 倍稀釋的TAE 電泳緩沖液30mL，加入10μL染色液，混勻后將膠浸泡30min，于紫外燈下觀察結(jié)果。
【結(jié)果判斷】
陽性對照出現(xiàn)400bp擴增帶，陰性對照無帶出現(xiàn)（引物帶除外）時，實驗結(jié)果成立。被檢樣品出現(xiàn)400bp擴增帶為豬偽狂犬病毒陽性，否則為陰性。
【需用但未提供的材料】
組織研磨器、眼科剪、眼科鑷、一次性注射器、瓊脂糖、滅菌1.5mL 離心管和吸頭（10 μL、200 μL、1000 μL）。
【注意事項】
1．本試劑盒有效期為6個月，不要使用超過有效期限的試劑，試劑盒之間的組分不要混用。
2．**試劑應在規(guī)定的溫度儲存，使用時拿到室溫下，使用后立即放回。
3．注意防止試劑盒組分受污染。使用前將塑料袋內(nèi)試劑瞬離15s，使液體**沉于管底，放于冰盒中，吸取液體時移液器吸頭盡量在液體表面層吸取。
4．嚴格按試劑盒說明書操作可以獲得好的結(jié)果。操作過程中移液、定時等**過程必須。
5．**接觸病料的物品均應合理處理，以免污染實驗室。
聯(lián)系方式
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聯(lián) 系 人： 林
聯(lián)系地址： 廣州市天河區(qū)車陂第十五工業(yè)園1棟4067室
電 話： 0571-85885083
