第二節(jié)　細(xì)胞免疫檢測(cè)

一、T細(xì)胞亞群檢測(cè)：

（一）T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)：細(xì)胞表面有綿羊紅細(xì)胞（SRBC）的受體，可與SRBC形成花環(huán)樣細(xì)胞，稱為紅細(xì)胞玫瑰花環(huán)形成或E玫瑰花環(huán)形成。

1、正常參考值：EtRFC64.4±6.7%；EaRFC23.6±3.5%；EsRFC3.3±2.6%。

2、臨床意義：

（1）E花環(huán)值減低：　①見于免疫缺陷�。ㄈ鏒igeorge綜合征，Wiskott－Aldrich綜合征，Nezelof綜合征）以及原發(fā)性細(xì)胞和體液免疫同時(shí)缺乏性疾病。上述這些病當(dāng)用胸腺素等治療后，EaRFC可明顯增高。②某些惡性腫瘤、麻疹、麻疹腦炎、腮腺炎、帶狀皰疹、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮肌炎、瘤型麻風(fēng)以及應(yīng)用免疫抑制劑時(shí)，亦見E花環(huán)值降低。有人認(rèn)為某些惡性腫瘤EaRFC可早于病情惡化的臨床表現(xiàn)，而EtRFT仍可正常�！�

（2）E花環(huán)值增高：見于甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺炎（此兩癥病情緩解時(shí)可恢復(fù)正常）、重癥肌無(wú)力、慢性活動(dòng)性或遷延性肝炎、慢性淋巴細(xì)胞白血病以及移植排斥時(shí)。

（二）細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)：T淋巴細(xì)胞與有絲分裂原在體外共同培養(yǎng)時(shí)，受到后者的刺激可發(fā)生形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的變化，部分小淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為不成熟的母細(xì)胞，并進(jìn)行有絲分裂，這種方法稱為淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。又稱T細(xì)胞返幼試驗(yàn)。T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，受到有絲分裂原如植物血凝素（PHA）刺激后，可轉(zhuǎn)化體積大的母細(xì)胞。

1、正常參考值：60.l±7.6%

2、臨床意義：T淋巴細(xì)胞在體外經(jīng)植物血凝素激活后，可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，根據(jù)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化情況，可反應(yīng)機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低表示細(xì)胞免疫水平低下，可見于運(yùn)動(dòng)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、惡性腫瘤、何杰金病、淋巴瘤、淋巴肉芽腫、重癥真菌感染、重癥結(jié)核、瘤型麻風(fēng)等。此外，本試驗(yàn)還可幫助觀察疾病的療效和預(yù)后，經(jīng)治療后轉(zhuǎn)化率由低值轉(zhuǎn)變?yōu)檎�常者表示預(yù)后良好，反之則預(yù)后不良。

（三）T細(xì)胞分化抗原測(cè)定：T細(xì)胞膜表面有100多種特異性抗原，現(xiàn)已制備了多種單克隆抗體，WHO（1986）統(tǒng)稱為白細(xì)胞分化抗原（CD）。例如CD3代表總T細(xì)胞，CD4代表T輔助細(xì)胞（TH），CD8代表T細(xì)胞毒性細(xì)胞（TC）等。應(yīng)用這些細(xì)胞的單克隆抗體與T細(xì)胞表面抗原結(jié)合后，再與熒光標(biāo)記二抗（兔或羊抗鼠IgG）反應(yīng)，在熒光顯微鏡下或流式細(xì)胞儀中計(jì)數(shù)CD的百分率。

1、正常參考值：免疫熒光法（IFA）：CD3為63.1%±10.8%；CD4（TH）為42.8%±9.5%；CD8（TS）為19.6%±5.9%；CD4/ CD8（TH/TS）為（2.2±0.7）/1。流式細(xì)胞術(shù)：CD3為61%～85%；CD4為28%～58%；CD8為19%～48%；CD4/ CD8為0.9～2.0/1。

2、臨床意義:

①CD3降低：見于自身免疫性疾病，如SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。

②CD4降低：見于惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷癥、艾滋病、應(yīng)用免疫抑制劑者。

③CD8減低：見于自身免疫性疾病或變態(tài)反應(yīng)性疾病。

④CD4/ CD8比值增高：見于惡性腫瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、變態(tài)反應(yīng)等；CD4/ CD8比值減低：見于艾滋病（常<0.5）。

⑤監(jiān)測(cè)器官移植排斥反應(yīng)時(shí)CD4/ CD8比值增高預(yù)示可能發(fā)生排斥反應(yīng)。

⑥CD3、CD4、CD8較高且有CD1、CD2、CD5、CD7增高則可能為T細(xì)胞型急性淋巴細(xì)胞白血病。

二、B細(xì)胞分化抗原檢測(cè)：B細(xì)胞具有多種特異性抗原和受體，據(jù)此建立了相應(yīng)的檢測(cè)方法，一般用以研究B細(xì)胞各分化發(fā)育階段的特性，也可藉以鑒定和計(jì)數(shù)各階段B細(xì)胞在人外周血和淋巴樣組織的分布以及疾病時(shí)的變化動(dòng)態(tài)，為臨床提供診治相關(guān)疾病的有用信息。B細(xì)胞表面有CD， CD19、CD20、CD21、CD22和CD29等分化抗原，其中有些系全部B細(xì)胞所共有，而有些僅活化B細(xì)胞所特有，據(jù)此可用相應(yīng)的CD系列單克隆抗體，通過(guò)間接熒光免疫法、酶免疫組化或ABC法加以檢測(cè)。健康成年人外周血CD20陽(yáng)性細(xì)胞約占淋巴細(xì)胞總數(shù)的8％～12％。

1、正常參考值：CD19＋11.74±3.37％。

2、臨床意義：

（1）升  高：見于急性淋巴細(xì)胞白血�。˙細(xì)胞型，且有Smlg、HLA-D表達(dá)），慢性淋巴細(xì)胞白血病和Burkitt淋巴瘤等。

（2）降  低：見于無(wú)丙種球蛋白血癥，使用化療或免疫抑制劑后。

三、自然殺傷細(xì)胞免疫檢測(cè)：

（一）自然殺傷細(xì)胞活性檢測(cè)：自然殺傷細(xì)胞是NK細(xì)胞的簡(jiǎn)稱。它不同于T細(xì)胞，也不同于K細(xì)胞，對(duì)靶細(xì)胞殺傷時(shí)既不需特異性抗體參加，也不需抗原預(yù)先致敏。主要存在于外周血、脾臟和骨髓中，淋巴結(jié)中含量極少，胸腺中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)�，F(xiàn)一般認(rèn)為，自然殺傷細(xì)胞來(lái)源于骨髓。其免疫活性比K細(xì)胞、T細(xì)胞要小得多，但T細(xì)胞獲得殺傷能力大約需10天左右的致敏時(shí)間，K細(xì)胞的殺傷作用又必須有IgG的特異性抗體的參與，而自然殺傷細(xì)胞卻能立即發(fā)揮非特異性殺傷靶細(xì)胞的作用，尤其是對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有迅速殺傷和溶解作用。因此，自然殺傷細(xì)胞對(duì)癌癥的監(jiān)視作用已越來(lái)越受到重視。

1、正常參考值：自然殺傷細(xì)胞占周圍淋巴細(xì)胞總數(shù)：3%～20% 51Cr釋放法：自然釋放率：＜10%～15% 自然殺傷率：47.6%～76.8% 51Cr利用率：6.5%～47.8% LDH:39.49±12.01 。

2、臨床意義：

(1)自然殺傷細(xì)胞總數(shù)正常但活力下降：腫瘤、慢性多發(fā)性硬化癥、感染性疾病。

(2)自然殺傷細(xì)胞總數(shù)和活力均下降：急性多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡。

（二）抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒（ADCG）測(cè)定：ADCG特異性由抗體決定，這類細(xì)胞表面有抗體Fc受體，當(dāng)與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，抗體被激活，ADCG細(xì)胞得以與抗體的Fc受體結(jié)合，引起靶細(xì)胞的殺傷與破壞。

1、正常參考值：51Cr釋放法：51Cr釋放率<10％為陰性，10％～20％為可疑陽(yáng)性，≥20％為陽(yáng)性；溶血空斑法<5.6％為陰性。

2、臨床意義：

（1）增  高：見于自身免疫性疾病，如自身免疫性血小板減少癥、自身免疫性溶血性貧血、免疫性粒細(xì)胞缺乏癥，甲狀腺功能亢進(jìn)，移植排斥反應(yīng)等。

（2）降  低：見于惡性腫瘤、免疫缺陷病、慢性肝炎、腎功能衰竭等。

四、細(xì)胞因子檢測(cè)：

（一）白介素－2（IL-2）活性及其受體測(cè)定：它是由多細(xì)胞來(lái)源（主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生），又具有多向性作用的細(xì)胞因子（主要促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化）；對(duì)機(jī)體的免疫應(yīng)答和抗病毒感染等有重要作用，能刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動(dòng)的T細(xì)胞增殖；能活化T細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生；刺激NK細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK殺傷活性及產(chǎn)生細(xì)胞因子，誘導(dǎo)LAK細(xì)胞產(chǎn)生；促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體；激活巨噬細(xì)胞。檢測(cè)體內(nèi)IL-2可判斷機(jī)體免疫功能。

1、正常參考值：5～15kU／L。

2、臨床意義：

（1）增  高：見于自身免疫性疾�。⊿LE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等）、再障、多發(fā)性骨髓瘤、排斥反應(yīng)等。

（2）降  低：鑒于免疫缺陷�。ò�滋病、聯(lián)合免疫缺陷病等）惡性腫瘤、I型糖尿病、某些病毒感染等。

（二）腫瘤壞死因子（TNF）測(cè)定：TNF主要由巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生。已發(fā)現(xiàn)TNF可對(duì)眾多的組織器官產(chǎn)生生物效應(yīng)，它是體內(nèi)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中重要的多功能物質(zhì)。TNF具有多種生物效應(yīng)，主要是介導(dǎo)抗腫瘤及調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，也是炎癥反應(yīng)介質(zhì)之一，參與炎癥病變的多方面病理變化。測(cè)定血清或其他體液中TNF濃度，是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床多種疾病的診療很有價(jià)值的指標(biāo)。

1、正常參考值：4.3＋－2.8ug／L。

2、臨床意義：

（1）腫瘤：許多腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生TNF，因此在多種腫瘤時(shí)機(jī)體內(nèi)TNF表達(dá)明顯升高。TNF又可通過(guò)細(xì)胞毒作用，殺死腫瘤細(xì)胞或抑制某些腫瘤細(xì)胞增殖。

（2）風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜中有大量TNF。

（3）在膿毒敗血癥、感染性肺炎等嚴(yán)重炎性疾病時(shí)血清中TNF含量明顯增高。許多寄生蟲病患者中TNF也顯著改變。艾滋病患者體液中TNF也高于正常人。瘧疾抗原、病毒和細(xì)菌均可誘導(dǎo)TNF產(chǎn)生，TNF又反過(guò)來(lái)具有抗病毒、抗細(xì)菌、抗瘧疾作用。

（4）TNF與移植排斥反應(yīng)密切相關(guān)，在患者的血清或尿液中TNF的表達(dá)與排斥反應(yīng)程度呈正相關(guān)。

（三）干擾素（IFN）測(cè)定：IFN分為兩型，Ⅰ型干擾索包括α-IFN和β-IFN是由白細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，Ⅱ型干擾素，又稱γ-IFN或免疫干擾素是由有絲分裂原刺激T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。干擾素是一種高效的抗病毒生物活性物質(zhì)，又是一種具有廣泛免疫調(diào)節(jié)作用的淋巴因子。干擾素檢測(cè)方法較多，如空斑減少法、病毒定量法、放免測(cè)定法與細(xì)胞病變抑制法等。

1、正常參考值：1～4kU／L（ELISA法）。

2、臨床意義：

（1）增  高：見于SLE、非活動(dòng)性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、惡性腫瘤早期、急性病毒感染、再障。

（2）減  低：見于乙肝及攜帶者、哮喘、活動(dòng)性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等。