第二節(jié)　臨床感染常見病原體檢測

一、細(xì)菌感染:

（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查：

1、顯微鏡放大法：細(xì)菌微小，肉眼不能直接看到，通常用光學(xué)顯微鏡油鏡頭，放大1000倍左右觀察細(xì)菌的形態(tài)，而細(xì)菌的內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)，則須用電子顯微鏡放大數(shù)萬倍方能觀察.

2、染色法：

⑴ 單染色法：用單一染料染色，可以觀察細(xì)菌的大小，形態(tài)和排列特點(diǎn)，但不能鑒別細(xì)菌。

⑵復(fù)染法：用兩種以上的不同染料染色，可將不同細(xì)菌染成不同顏色，除可觀察細(xì)菌的形態(tài)特征外，還能鑒別細(xì)菌.最常用的有革蘭染色法，細(xì)菌染色法中還有抗酸染色和莢膜，芽胞，鞭毛，細(xì)胞壁，核質(zhì)等特殊染色法。

（二）分離和鑒定：是確診細(xì)菌性感染最可靠的方法，鑒定的主要內(nèi)容有：

1、細(xì)菌培養(yǎng)：標(biāo)本接種于培養(yǎng)基，以獲得純培養(yǎng).根據(jù)細(xì)菌所需營養(yǎng),生長條件，菌落特征做初步鑒別.

2、分離鏡檢：對菌落或純培養(yǎng)物，經(jīng)涂片染色后鏡檢，根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)，排列，大小，染色性和特殊結(jié)構(gòu)等做初步鑒別.

（三）生化反應(yīng)：不同的病原菌有不同的酶系統(tǒng)，代謝產(chǎn)物也不盡相同，因而有助于鑒別細(xì)菌。

（四）血清學(xué)鑒定：用含已知特異性抗體的診斷血清與分離培養(yǎng)出的未知純種菌作玻片凝集試驗(yàn)，以確定病原菌的種或型.也可用免疫熒光，協(xié)同凝集試驗(yàn)，對流免疫電泳，放射免疫，酶免疫等快速，敏感的方法，從標(biāo)本中直接檢測特異抗原，有助確定病因。

（五）動(dòng)物試驗(yàn)：主要用于分離，鑒定病原菌，測定菌株產(chǎn)毒性等，常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有小白鼠，豚鼠和家兔。

（六）藥物敏感試驗(yàn)：對指導(dǎo)臨床選擇用藥，及時(shí)控制感染有重要意義.常用的方法為單片紙碟法和試管稀釋法。

（七）病原菌抗原的檢測：用已知特異性抗體測未知抗原，其優(yōu)點(diǎn)是快速，靈敏，特異性高。常用的免疫技術(shù)有：沉淀反應(yīng)、協(xié)同凝集試驗(yàn)、免疫熒光法（IF)、對流免疫電泳（CIE)、酶免疫測定（EIA)、免疫印記技術(shù)。

（八）其他檢測法：

1、氣-液相色譜法：常用于厭氧菌的檢測.

2、基因診斷法：不同種的細(xì)菌有不同的基因或堿基序列，通過檢測微生物的特異基因序列是否存在的診斷方法，稱為微生物的基因診斷.常用的有核酸雜交，PCR和DNA指紋圖譜等。

二、病毒感染：確診須依靠病毒分離和血清學(xué)檢查。

（一）病毒分離：可用組織培養(yǎng)、雞胚和動(dòng)物接種。應(yīng)用電鏡、免疫電鏡、免疫熒光法、酶聯(lián)免疫法及放射免疫法等可直接檢查標(biāo)本中的病毒顆粒及病毒抗原，常用作快速和早期診斷，如糞便中的甲肝病毒和輪狀病毒的顆�？捎秒婄R和免疫電鏡檢出。

（二）血清學(xué)檢查：可用免疫擴(kuò)散法、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、血凝法（間接血凝法和反向被動(dòng)血凝法）、免疫熒光法、酶聯(lián)免疫法及放射免疫法等測定血清和體液中的特異性抗體。檢測抗原有助于早期診斷。檢測抗體，一般須檢測急性期和恢復(fù)期雙份血清，恢復(fù)期血清抗體滴度較急性期血清升高4倍以上才有診斷意義。檢測特異性IgM抗體有助于早期和現(xiàn)癥病人的診斷。

（三）其  他：近年來，應(yīng)用分子雜交技術(shù)和聚丙烯酰胺凝膠電泳法診斷病毒性疾病，不僅有很高的敏感性和特異性，而且可以診斷不同型和株的病毒感染。此外，應(yīng)用單克隆抗體檢測病毒抗原，也大大提高了診斷病毒性疾病的敏感性和特異性，而且用作對病毒抗原結(jié)構(gòu)的研究。

三、真菌感染：真菌是以腐生或寄生方式攝取營養(yǎng)的真核細(xì)胞型微生物。真菌感染的診斷手段主要包括直接鏡檢、培養(yǎng)檢查、免疫學(xué)試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。但這些方法自身還存在一些局限性，且不能幫助判斷檢測的陽性結(jié)果是感染還是定植，在檢測過程中易出現(xiàn)假陽性和假陰性等，因此，其結(jié)果判讀需結(jié)合臨床全面分析。

四、寄生蟲�。�寄生蟲是單細(xì)胞或多細(xì)胞體侵入宿主后，可在宿主體內(nèi)寄生、發(fā)育而導(dǎo)致感染。寄生蟲感染的實(shí)驗(yàn)室診斷的主要依據(jù)包括病原學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷和其他實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查。但病原學(xué)診斷檢出率較低，對于組織中或器官內(nèi)寄生而不易取材的寄生蟲，可考慮采用免疫學(xué)診斷方法，其敏感性和特異性可大大提高。近年來發(fā)展的DNA探針技術(shù)和聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)診斷效率更佳。

五、其他病原體感染：

（一）支原體檢測：支原體檢查法是檢查人體是否受到支原體的感染，為臨床診斷與治療支原體感染患者提供依據(jù)的一種檢查方法。支原體只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細(xì)胞表面的受體上，而不進(jìn)入組織和血液。分離培養(yǎng)、特異性抗血清生物抑制試驗(yàn)或代謝試驗(yàn)是其確診依據(jù)，DNA探針技術(shù)和熒光定量PCR技術(shù)可用于快速診斷。

（二）螺旋體檢測：螺旋體是一群細(xì)長、柔軟、運(yùn)動(dòng)活波、呈螺旋狀的微生物，顯微鏡下發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)活潑、特殊形態(tài)的螺旋體具有診斷意義；血清學(xué)檢測包括顯微鏡凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)吸附試驗(yàn)檢驗(yàn)血清中特異性抗體是常用方法；VDRL法、RPR法、FTA-ABS法、MHA-TP法、PCR法都是較好的確診方法。

（三）立克次體檢測：立克次體是介于細(xì)菌與病毒之間的微生物，變形桿菌OX19與斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、落磯山斑疹傷寒病原體有共同抗原;OXK與恙蟲病病原體有共同抗原，可以用變形桿菌OX19菌液代替普氏立克次體作血清學(xué)試驗(yàn)，用于診斷流行性斑疹傷寒，同時(shí)以3種菌液做外斐反應(yīng)，用于鑒別診斷立克次體病。

1、外斐試驗(yàn)：滴定效價(jià)在1：160以上者為陽性，有4倍以上增長者則更具診斷意義。該實(shí)驗(yàn)簡便，但特異性較差，可與回歸熱、瘧疾、傷寒以及變形桿菌感染等交叉凝集而出現(xiàn)假陽性。

2、血清學(xué)診斷方法：IFA、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）、固相放射免疫測定（SPRIA）以及間接血凝試驗(yàn)等檢測特異性免疫球蛋白M（IgM）或免疫球蛋白G（IgG），特異性高。

3、其  他：免疫電鏡、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測也有助于診斷。

（四）衣原體檢測：衣原體按其特性分為三類：沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體。沙眼衣原體有15個(gè)已知的血清型，其中12個(gè)血清型與沙眼和生殖道的感染有關(guān)；另外3個(gè)則與性病性淋巴肉芽腫（LGV）的發(fā)生有關(guān)。沙眼衣原體快速檢測目前分定性和定量快速檢測。目前流行常用的為金標(biāo)定性快速檢測。應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)，采用雙抗體夾心的形式建立的衣原體檢測方法，用于女性宮頸和男性尿道中衣原體的檢測。臨床輔助診斷衣原體感染，試驗(yàn)結(jié)果還需要臨床醫(yī)生結(jié)合患者癥狀、體征及其它檢查結(jié)果進(jìn)一步確定的目的。金標(biāo)法定性沙眼衣原體快速檢測有著快速、方便、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)。為臨床醫(yī)生的輔助診斷等節(jié)省了很多時(shí)間。為目前市面上沙眼衣原體快速檢測的主流。

（五）流行性感冒病毒檢測：流行性感冒（簡稱流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，主要通過空氣飛沫傳播。流感病毒有甲、乙、丙三個(gè)型，其中甲型所引起的流感流行最為廣泛和嚴(yán)重，乙型常引起爆發(fā)，丙型則多引起小兒散發(fā)病型。在我國雖將該病歸屬于法定丙類傳染病，但一旦流行，傳播快、波及面廣，對人民健康及勞動(dòng)生產(chǎn)力有很大影響，而且對年老體弱多病者及嬰幼兒的威脅較大。流感流行時(shí)一般根據(jù)臨床癥狀、結(jié)合流行病學(xué)可對病人作出初步診斷。如確定診斷則需要分離病毒陽性或病人雙份血清抗體，測定恢復(fù)期抗體較急性期增高4倍或以上。

（六）嚴(yán)重急性呼吸道綜合癥（SARS）病毒檢測：嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS），俗稱傳染性非典型肺炎，也稱非典型肺炎。是由SARS冠狀病毒（SARS-CoV）引起的一種具有明顯傳染性、可累及多個(gè)臟器系統(tǒng)的特殊肺炎。世界衛(wèi)生組織（WHO）將其命名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）。臨床上以發(fā)熱、乏力、頭痛、肌肉關(guān)節(jié)酸痛等全身癥狀和干咳、胸悶、呼吸困難等呼吸道癥狀為主要表現(xiàn)，部分病例可有腹瀉等消化道癥狀；胸部X線檢查可見肺部炎性浸潤影、實(shí)驗(yàn)室檢查外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常或降低、抗菌藥物治療無效是其重要特征。重癥病例表現(xiàn)明顯的呼吸困難，并可迅速發(fā)展成為急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）。特異性病原學(xué)檢測：

1、SARS-CoV血清特異性抗體檢測：發(fā)病10天后采用IFA，在患者血清內(nèi)可以檢測到SARS-CoV的特異性抗體（若采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），則在發(fā)病21天后）。從進(jìn)展期到恢復(fù)期抗體陽轉(zhuǎn)或抗體滴度呈4倍及以上升高，具有病原學(xué)診斷意義。首份血清標(biāo)本需盡早采集。

2、SARS-CoVRNA檢測：準(zhǔn)確的SARS-CoVRNA檢測具有早期診斷意義。采用RT-PCR方法，在排除污染及技術(shù)問題的情況下，從呼吸道分泌物、血液或糞便等標(biāo)本中檢出SARS-CoV的RNA，尤其是多次、多種標(biāo)本和多種試劑盒檢測SARS-CoVRNA陽性，對病原學(xué)診斷有重要支持意義。

3、其他早期診斷方法：免疫熒光抗體試驗(yàn)檢測鼻咽或氣道脫落細(xì)胞中SARS-CoV特異性結(jié)構(gòu)蛋白檢測，及基因芯片技術(shù)等檢測方法，尚待進(jìn)一步研究。